Stbl3：                                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存条件(保质期)：                                 -80℃（6个月） 

基因型

F- mcrB mrr hsdS20(r_B^-, m_B^-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Str^R) xyl-5 λ^-leu mtl-1 endA1+

产品说明

Stbl3菌株来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株?；蜃楹兄刈槊?em>recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性，不存在lacI^qZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率>10⁸cfu/μg DNA。 

操作方法

1. Stbl3感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质?；蛄硬? 并用手打EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。

4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。

(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）

5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。

6. 将平板倒置放于37℃或30℃培养箱过夜培养。

(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜)

注意事项

1. 对不稳定DN片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后平板应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。

2. 制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。

3. 对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。

4. S.O.C.或LB培养基均可使用，S.O.C.可提高转化效率20%；实验人员可选择在37℃或30℃培养细胞，37℃条件下，菌生长速度加快，有利于提高质粒产量，30℃培养可降低错误重组概率。

5. 感受态细胞好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率?；烊肽康腄NA时应轻柔操作。

6. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僦沼糜谕堪宓木?/span>