XL1-Blue MRF` Kan:                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                       10μl

保存条件（保质期）：                           -80℃（6个月）

基因型

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F´proAB lacIqZ?M15 Tn5 (Kan^R)]

产品说明

XL1-Blue MRF’Kan菌株来源于XL1-Blue株系，是限制酶系统缺失型[?(mcrA)183, ?(mcrCB-hsdSMR -mrr)173],，且具有卡那霉素抗性 (Kan^R)，可转化具有氯霉素或四环素抗性的质粒。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdR17突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue MRF’Kan菌株可用于蓝、白斑筛选。XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手打EP管底充分混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞具有卡那霉素抗性，不可转化具有卡那霉素抗性的质粒。

3. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僦沼糜谕堪宓木俊?/p>