GT115：                                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期)：                            -80℃（6个月） 

基因型

F^- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1 rpsL (Str^R) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

产品说明

GT115菌株，是专门用来克隆含有发夹结构（Hairpin）或重复序列等DNA二级结构的基因序列的大肠杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种SbcCD蛋白复合体，可以识别DNA发夹结构，并将其切除；将sbcC和sbcD两个基因突变，增强了发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表达 兀 蛋白，含有R6Kg ori复制子的质粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常复制。该菌株还含有具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recA)突变，增强了外源DNA的稳定性。GT115感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19检测转化效率>2×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. GT115感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手打EP管底混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。

4. 37℃，225 rpm复苏60分钟。

5. 5000 rpm离心1分钟收菌，留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。

6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僦沼糜谕堪宓木?。

2. 此菌株具有链霉素抗性，拥有这种抗性的质粒无法使用。