MG1655：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                     10μl

保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月）

基因型

K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1

产品说明

MG1655菌株来源于W1485，是K12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型”的大肠杆菌工程菌株。MG1655外观形态标准，同时可做为扩增大肠杆菌WT型基因的模板使用，也可作为蛋白表达的宿主菌株使用，但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的质粒被降解。pUC19质粒检测转化效率>0.5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. MG1655感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。