产品规格（CAT#: DL1047）

Stbl4：                                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存条件(保质期)：                                  -80℃（6个月） 

基因型

F′ proAB+ lacIqZ?M15 Tn10 (Tet^R)mcrA ?(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal- thi-1 supE44 λ- relA1?(lac-proAB)

产品说明

Stbl4菌株来源于 Stbl2 E. coli strain，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建。Stbl4菌株适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列，逆转录病毒序列等)；mcrA突变和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列。recA 1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacI^qZΔM15标记使得Stbl4菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素抗性。唯地生物生产的Stbl4感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Stbl4感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质?；蛄硬铮┎⒂檬諩P管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏70分钟。

当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上，平板倒置放于37℃培养箱过夜培养17-20小时或30℃培养箱过夜培养20-24小时。若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜。

5.若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基中30度摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：500ml三角瓶中加入100ml TB营养液，经30度250rpm摇菌，可提取约100-200ug PUC19质粒）

●TB 培养基配方
1.2%     Tryptone
2.4% Yeast Extract
4%        甘油
17mM   KH2PO4
72mM   K2HPO4
配制方法（1L）：
1，   配制磷酸缓冲液（0.17M  KH2PO4, 0.72M  K2HPO4）：
溶解2.31g KH2PO4和 12.54g K2HPO4于90ml去离子水中，定容到100ml，高压灭菌。
2，在烧杯中加入以下试剂：Tryptone 12g， Yeast Extract    24g，甘油  4ml；加入去离子水800ml,充分溶解后，定容至900ml，高压灭菌。
3，待溶液冷却至60度以下，加入100ml 灭菌磷酸盐缓冲液。