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TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)
  • TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)

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更新時間:2025-05-29 21:00:08

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TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)
基因組DNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測,這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細(xì)胞凋亡的原理

TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)

TUNEL檢測的原理: 

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bpDNA ladder。基因組DNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測,這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細(xì)胞凋亡的原理。

TUNEL檢測實(shí)驗(yàn)

TUNEL檢測(石蠟切片)

取下適當(dāng)?shù)男迈r的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛與組織塊體積比在10:120:1之間,4攝氏度保存運(yùn)輸;

TUNEL檢測(冰凍切片)

取下的新鮮組織應(yīng)立即放入超低溫冰箱或者液氮中,用干冰運(yùn)輸,固定好的切片應(yīng)于-80或者-20度保存,并盡快用于檢測;

TUNEL檢測(細(xì)胞爬片)

細(xì)胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min,換PBS緩沖液4度保存運(yùn)輸,盡快用于檢測;

 

熒光法需要先拍一張凋亡熒光圖,再拍一張?jiān)蝗竞藞D,再合并圖層,終我們提供的為三張熒光圖片。

 

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