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EMSA組學(xué)技術(shù)服務(wù)
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更新時(shí)間:2025-07-07 21:00:08

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EMSA組學(xué)技術(shù)服務(wù)
凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)和DNA序列相結(jié)合的技術(shù),初用于研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分為2種類型:同位素標(biāo)記探針,非同位素標(biāo)記探針。

EMSA組學(xué)技術(shù)服務(wù)

  凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)和DNA序列相結(jié)合的技術(shù),初用于研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分為2種類型:同位素標(biāo)記探針,非同位素標(biāo)記探針。

  通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。在檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白時(shí),依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競爭實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RNA和寡核苷酸序列(特異),和其它非相關(guān)的序列(非特異),來確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異序列的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來確定特異結(jié)合。

   EMSA組學(xué)技術(shù)服務(wù)步驟:探針的標(biāo)記,探針的純化,EMSA膠的配制,EMSA的結(jié)合反應(yīng),探針冷競爭反應(yīng),突變探針冷競爭,super-shift 反應(yīng),電泳。

內(nèi)容:包含電子版掃膜結(jié)果及灰度值分析,每張膜可做1-7個(gè)樣本。

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