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SILAC

背景簡介：

    SILAC( Stable Isotope  Labeling with   Amino acids in  Cell culture)技術是依據細胞生長對必需氨基酸的依賴原理，利用穩(wěn)定同位素標記( 13C，15N，2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質組進行代謝標記的方法；13C,15N,2H是穩(wěn)定同位素，沒有放射性，因此可以在常規(guī)條件下進行試驗。

    Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。將(13C，15N，2H)等穩(wěn)定同位素標記的R、K、L加入細胞培養(yǎng)基中，在細胞進行蛋白質合成時，這些穩(wěn)定同位素標記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質中。通過>6代的細胞增殖，整個細胞的蛋白質組會被 

穩(wěn)定同位素氨基酸”標記”；

     SILAC“標記”了蛋白質與“未標記”的蛋白質（普通培養(yǎng)基培養(yǎng)）存在數目的質量差異，該質量差異在后續(xù)LC-MS的質譜( MSl)中呈現(xiàn)一對同位素質譜峰，通過質譜峰的信號強度能實現(xiàn)對2組樣品中每一個蛋白質表達水平的定量，終能確定蛋白質表達水平差異（差異蛋白質組學分析）和區(qū)分特異性和非特異性相互作用（蛋白質相互作用分析）；同時通過質譜( MS/MS，MS2)實現(xiàn)對樣品中蛋白質的鑒定。

     SILAC技術結合LC-MS能同時實現(xiàn)對2組樣品中蛋白質的定性和定量分析。通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質表達水平差異，便于快速找到感興趣的目標分子。同時，利用SILAC技術，能明顯提高文章的

檔次。

SILAC氨基酸對照表：

SILAC實驗設計：