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RT-PCR

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更新時間:2024-03-14 11:46:18瀏覽次數(shù):591次

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RTPCR,反轉(zhuǎn)錄·聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(reverse transcription )和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。

首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR%E6%8A%80%E6%9C%AF/176650?fromModule=lemma_inlink">RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛,可用于檢測細(xì)胞基因表達(dá)水平,細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA體外轉(zhuǎn)錄RNA產(chǎn)物。無論使用何種RNA,關(guān)鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組 DNA的污染。

提取組織或細(xì)胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,采用Oligo(dT)或隨機(jī)引物利用反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。


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