FLUO-EV是稳定表达荧光蛋白EGFP（绿色）和mCherry（红色）与四泛蛋白CD63和CD9融合蛋白的胞外囊泡。FLUO-EV 是通过切向流过滤（TFF）和尺寸排阻色谱法（SEC）从基因工程细胞中纯化出来的，以共同表达 CD63-EGFP 和 CD9-mCherry。FLUO-EVs 显示出荧光团的高稳定性，可用于体外跟踪研究，或作为纳米颗粒分析仪的参考材料，或用于检测校准。

细胞外囊泡（EVs）是一种脂质膜结合的颗粒，通过传递生理过程所必需的调节分子参与细胞间的交流。由于细胞外囊泡能有效载运特定的货物分子，因此被认为是治疗药物的合适载体。药物可以通过主动的外源策略或对产生囊泡的细胞进行基因修饰来装载到 EVs 中。为了生产输送治疗蛋白的EVs，我们对HEK293和肿瘤细胞进行了基因改造和比较。在 HEK293 中，基于四聚碳酸酯的 RFP 融合蛋白更加稳定，并优先分选到 EV 中。从转基因 HEK293 细胞介质中分离出的 EV 被癌细胞捕获，有效地运送了它们的货物。在 CD9/CD81 和 RFP 之间引入的 Cathepsin B 裂解位点被肿瘤特异性蛋白酶识别，使报告蛋白得以释放。我们的研究结果表明，HEK293 细胞是产生 EVs 的系统，为开发纳米平台向肿瘤细胞高效递送治疗蛋白和原药铺平了道路。