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蘇州千舍生物科技有限公司

無外泌體血清該如何制備?

時間:2022-8-30閱讀:4398
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  外泌體是指含有復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜囊泡(30-150nm)。如今,它們特指直徑為40-100nm的盤狀囊泡。作為細(xì)胞間通訊的重要媒介,它作為信使,為細(xì)胞和細(xì)胞外環(huán)境傳遞信息,保證機體的正常工作。對于大多數(shù)細(xì)胞而言,用于體外培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基必須在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加胎牛血清(FBS)作為生長添加劑。然而,常用的FBS通常來自牛血清,其中含有大量的牛外泌體和外源性細(xì)胞外囊泡。這些外泌體含有牛相關(guān)蛋白或miRNA和其他分子。在研究相關(guān)細(xì)胞自身分泌的外泌體時,牛血清中的外泌體可能會造成嚴(yán)重的背景問題,從而影響或干擾結(jié)果的判斷。在細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)、細(xì)胞分泌的外泌體等相關(guān)研究中,血清中所含的外泌體會對研究結(jié)果產(chǎn)生巨大的干擾作用。
  
  無外泌體血清*可以滿足外泌體研究中對細(xì)胞培養(yǎng)條件的要求。以優(yōu)質(zhì)胎牛血清為源血清,經(jīng)特定方法處理后,血清中外泌體去除率達(dá)到97%以上。通過細(xì)胞生長實驗,含有外泌體freefbs的培養(yǎng)基支持大多數(shù)細(xì)胞的生長。與含有正常血清(FBS)的培養(yǎng)基相比,對細(xì)胞生長和存活有相同甚至更好的促進(jìn)作用。
 
  

無外泌體血清
 

 

  制備無外泌體血清常用的方法是超速離心。主要有三種方法:將血清與培養(yǎng)基按1:4比例稀釋,然后超速離心10000g過夜收集上清液;血清10000g直接離心過夜;以180000g離心3-6小時。隔夜離心時間視情況而定,一般在10-14小時之間。
  
  需要注意的是,離心后,外泌體會在試管底部富集。吸上層血清時不要接觸底部沉淀物。上層血清約80%被吸收,剩余的混濁血清留作其他非外泌體細(xì)胞的培養(yǎng)。對于超速離心后的血清,可以檢測粒徑(離心前后的樣品)。如果純度不夠,則將離心后收集的血清進(jìn)行第二次超速離心。
  
  無外泌體血清使用注意事項:
  
  1、產(chǎn)品冷凍后,高豐度蛋白會形成晶體,NTA檢測時會出現(xiàn)異峰,屬正?,F(xiàn)象。
  
  2、本產(chǎn)品已滅菌,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。使用前請將產(chǎn)品置于2-8℃自然解凍,或分裝后于-20℃保存,但不要反復(fù)凍融。
  
  3、請勿使用本產(chǎn)品進(jìn)行高溫?zé)釡缁睢?/div>

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