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電泳儀的毛細管柱制備方法介紹

閱讀：1790 發(fā)布時間：2022-11-26

　　毛細管凝膠電泳儀將凝膠電泳儀對生物大分子的分離能力與毛細管電泳儀的快速、微量和定量分析相結(jié)合，是當(dāng)今分離度高的一種分離技術(shù)。將聚丙烯酰胺等在毛細管中交聯(lián)生成凝膠，以凝膠作為載體進行電泳，凝膠具有多孔性，類似分子篩的作用，樣品分子按大小分離。

　　電泳儀的毛細管柱制備方法如下：

　　1.檢測窗口制備：

　　毛細管的聚酰亞胺涂層不透明，檢測窗口部位的聚酰亞胺必須剝離除去，剝離長度為2-3mm。常用剝離方法有硫酸腐蝕法、灼燒法和刀片刮除法。

　　2.毛細管內(nèi)壁修飾：

　　用120℃熱空氣吹，然后用室溫氨氣沖洗2h，再用50%3－甲基丙烯酰氧丙基－三甲氧基硅烷充滿12h，后用甲醇和水沖洗。

　　3.緩沖溶液制備：

　　將1.1g Tris和0.01g EDTA溶于100mlL 7M尿素溶液中，用NaH2PO4調(diào)至pH=8.6。

　　4.單體溶液制備：

　　將29g丙烯酰胺和1g N－甲叉雙丙烯酰胺溶解在100mlL緩沖溶液中。

　　5.催化劑制備：

　　將0.2g過硫酸銨溶于2mL緩沖溶液中。

　　6.凝膠溶液制備：

　　將10mlL單體溶液加入到30mlL緩沖溶液中，用4μL催化劑溶液和2.5μL四甲基乙二胺（TEMED）預(yù)聚合45min。

　　7.灌注聚合：

　　將上述凝膠溶液注入毛細管到無氣泡，將柱兩端浸入緩沖溶液中聚合數(shù)小時。