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流式細胞分選科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀：153 發(fā)布時間：2024-9-19
應(yīng)用簡介
用免疫磁珠做細胞分選(MACS)是高效簡捷的免疫細胞及其它細胞的分離純化方法。已包被一抗的磁珠與細胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠與預(yù)先已與細胞表面分子特異結(jié)合的一抗結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細胞吸附于分離柱/試管上，實現(xiàn)陽性細胞分離或陰性細胞的分離。
技術(shù)原理
流式分選：當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細胞的分離。
磁珠分選：免疫磁珠細胞分選法是把細胞用超級順磁性的(MACS微型磁珠)特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細胞通過一個放在強而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個高梯度磁場。被磁性標(biāo)記的細胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細胞就可以被洗脫出來，這樣就萬全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個細胞組份。
實驗方法
本次實驗是用免疫磁珠做細胞分選(MACS)。實驗流程如下：
1、如果分離細胞用作培養(yǎng)，全過程在超凈臺中完成。
2、超微磁珠及微小磁場系統(tǒng)適合于少量細胞分離(如106-107)，通常已適用于大多數(shù)實驗研究；此外各公司尚有大磁珠及大磁場供應(yīng)，可用于更大量細胞的分選；除分離柱外，也有試管及其它設(shè)備用于分選；根據(jù)我們應(yīng)用的經(jīng)驗，分離柱由于提供了較大的接觸面，在細胞分選上具有較多優(yōu)點。磁場也可以自制，用一般的磁鐵即可做成簡易磁場，可提供足夠的磁力。
3、磁珠分離系統(tǒng)分離的細胞純度可以達到80~99％，得率在60~90％左右，僅次或相當(dāng)于流式細胞儀（FACS）的分選效率，與FACS相比，MACS設(shè)備簡單，耗時極短，故而應(yīng)用廣泛。MACS也可用做FACS分選前的預(yù)分離，以減少FACS所用時間。另外連續(xù)兩次過柱分選可進一步提高分選細胞純度，通?？蛇_95－99％。
4、在分離柱尾接上限速針頭，收集的收次流下的細胞即為陰性選擇細胞，一般純度低于陽性選擇。
5、分離柱一般只能一次應(yīng)用，再用時降低分離效率；
6、分選下的細胞可用熒光標(biāo)記抗體(一抗或二抗)標(biāo)記后FACS鑒定純度；我們用熒光抗體直接標(biāo)記細胞后，用二抗包被磁珠分選出細胞，直接做FACS分析，也可實現(xiàn)分選和純度檢測。
7、陽性選擇后，如需用第二種表面標(biāo)志繼續(xù)分離，可以用剪切酶剪切下之結(jié)合的磁珠和一抗，再次進行下一輪分選。如需進行細胞功能分析，也可經(jīng)培養(yǎng)12~24小時，使結(jié)合的磁珠脫落后進一步使用陽選的細胞做研究。