昆虫组织蛋白酶B（CTSB）ELISA试剂盒

产品简介：

样本类型：血清、血浆、组织、细胞上清或其他生物样本

检测方法：双抗夹心法

储藏及保存：2-8度，6个月

检测原理：

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

产品内容：

实验所需仪器及设备：

实验操作流程：

第一步：试剂盒室温平衡 30min ，然后从铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

第二步：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL。

第三步：样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。

第四步：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

第五步：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

第六步：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

第七步：每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 O.D 值。

注：

昆虫组织蛋白酶B（CTSB）ELISA试剂盒

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

◆ 仔细阅读说明书
◆ 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期，请勿使用。
◆ 按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）
◆ 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。
短期内无法实验者，注意低温保存
◆ 准备好所有实验额外所需物品， （比如移液器，试管，清洗器， 酶标仪）
◆ 按说明书将所用试剂平衡至室温，根据检测标本数量确定所需试剂的量
◆ 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件，保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。
◆ 检查不稳定或者变质的试剂溶液（比如沉淀或变色）。有些试剂，比如标准品稀释液或者检测稀释液，可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前，必需充分混匀。而由于沉淀物的特性，在加入酶标板之前，必需不停搅拌。
◆ 保证充分的孵育时间和温度。
◆ 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液时，避免泡沫产生。
◆ 在实验开始之前，安排好实验流程。
◆ 在实验开始之前，清洁工作台。
◆ 若有问题，应与我公司或代理商进行沟通。

我的标准曲线是平的或者是非线性的，这可能是由于什么原因引起的？
引起不理想的标准曲线的原因有很多，常见的原因例举如下：
◆ 确定稀释是否得当。
◆ 确定波长是否正确。
◆ 标准品和样品必需在15-20分钟内滴加入板内。（除非试剂盒内说明书特别说明）
◆ 检查背景是否过高。
◆ 确定酶标板是否正确洗涤。 不恰当的洗涤可能会引起具有高背景的平直曲线。
◆ 在测定过程中重复读板。在超过建议时间后读板会导致错误的结果。
◆ 如果高的标准品的读数超过了酶标仪的范围，确定标准品是否正确溶解，孵育时间和温度是否准确。
◆ 为保证实验准确性请重复测定。
◆ 如果使用对照，对照的浓度必须在测定范围内。
◆ 在检测和孵育过程中确定试剂没有被污染。
◆ 没有任何信号的平直标准曲线可能是由于酶结合物或者底物没有反应。 检查各个操作过程
◆ 由于许多酶标仪的限制，因此建议标准品检测由高向低做复孔。

我是否可以更改底物处理的方法？
◆ 如果反应物溶液需要混合，确保加入的反应物试剂体积正确并充分混合?；旌虾蟮娜芤罕匦柙?5分钟内使用（化学发光检测多4小时）。如果反应物混合得太早，则在容器中的颜色可能会发生变化。
◆ 如果底物是冻干品或片剂，则根据说明书中的方法用适当体积的稀释液将其*溶解?；旌?后并在说明书中推荐的时间内使用。

我在移液的时候是否要按照一定的顺序？
◆ 根据说明书中的顺序进行移液操作。
◆ 高灵敏度检测利用了放大系统。在底物孵育完成之后，按照加底物的顺序依次加入放大试剂。
◆ 底物加完之后，轻拍酶标板使其充分混合。
底物有可能被污染吗？
◆ 是的。如果测定时使用的是碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶标记的结合物，在测定时要注意避免污染。污染可能会导致产生超过酶标仪范围的值。避免与金属或氧化试剂接触。使用新容器。
底物是否需要在黑暗环境中进行孵育？
◆ 不需要。不过在孵育过程中应避免阳光直射。

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