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DNA定量分光光度計對濃度的測定判定

閱讀：96 發(fā)布時間：2025-6-25

DNA定量分光光度計是一種基于核酸分子在特定波長下對紫外光的吸收特性來測定DNA濃度的儀器，其濃度測定判定主要依據(jù)吸光度值（A）及相關(guān)比值，以下為你詳細介紹：

濃度測定原理

DNA分子中的堿基具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，在260nm波長處有最大吸收峰。根據(jù)朗伯-比爾定律，吸光度與溶液中吸光物質(zhì)的濃度成正比，即A=

varepsiloncl（其中A為吸光度，

varepsilon為摩爾吸光系數(shù)，c為溶液濃度，l為光程長度）。通過測量DNA溶液在260nm處的吸光度，再結(jié)合已知的摩爾吸光系數(shù)和光程長度，即可計算出DNA的濃度。

?比值應(yīng)大于2.0。如果比值低于2.0，可能表示樣品中存在鹽離子、酚、氯仿等雜質(zhì)。

影響測定結(jié)果的因素及注意事項

樣品純度：樣品中的蛋白質(zhì)、RNA、鹽離子、有機溶劑等雜質(zhì)會影響吸光度的測量，從而影響濃度測定的準確性。因此，在測定前應(yīng)盡量提高DNA樣品的純度。

樣品稀釋：如果樣品濃度過高，需要進行適當(dāng)?shù)南♂尅Ｏ♂寱r應(yīng)使用與測量時相同的緩沖液，并且要準確記錄稀釋倍數(shù)。

儀器校準：定期對分光光度計進行校準，確保儀器的準確性和穩(wěn)定性。校準包括波長校準和吸光度校準等。

測量環(huán)境：測量時應(yīng)避免強光直射和溫度變化過大，以免影響測量結(jié)果。同時，要保持比色皿的清潔，避免劃痕和污染。