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1.封閉將封閉溶液添加至樣品中。去除封閉溶液。

2.一抗將一抗在適當?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。在合適的緩沖液清洗幾次，

3.將兩份PLA探針，以1：5的比例在適當?shù)木彌_液中稀釋，并添加至樣品中。

4.在H2O中以1：5的比例稀釋連接儲液。在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶并將混合物添加至樣品中。

5.在H2O中以1：5的比例稀釋擴增儲液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶并將混合物添加至樣品中。

6.成像準備使用含有DAPI的Duolink原位封固劑加載樣品，等待約一刻鐘，然后在熒光或共聚焦顯微鏡下進行分析。