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凱氏定氮法測(cè)牛奶中蛋白質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果偏高是為什么
凱氏定氮法只能檢測(cè)蛋白質(zhì)中氮含量,不能檢測(cè)氨基酸的含量。其中蛋白質(zhì)含量也只是稱為粗蛋白質(zhì)的含量,只是用氮的含量乘以6.25(系數(shù))得出,不是真正的蛋白質(zhì)的含量。
凱氏定氮法測(cè)氮的方法如下:
1、稱取0.5~1g試樣(含氮量5~80mg)準(zhǔn)確至0.0002g,無(wú)損失地放入凱氏燒瓶中,加入硫酸銅0.9g,無(wú)水硫酸鉀(或硫酸鈉)15g,與試樣混合均勻,再加硫酸25ml和2粒玻璃珠,在消煮爐士小心加熱,待樣品焦化,泡沫消失,再加強(qiáng)火力(360~410℃)直至溶液澄清后,再加熱消化15min。
2、氨的蒸餾
(1)常量直接茂餾法 將上述的試樣消煮液冷卻,加蒸餾水200ml,搖勻,冷卻。沿瓶壁小心加入40%氫氧化鈉溶液100ml,立即與蒸餾裝置相連.蒸餾裝置冷凝管的末端應(yīng)浸入50ml硼酸吸收液lcm。加混合指示劑2滴,輕搖凱氏燒瓶,使溶液混勻,加熱蒸餾,直至餾出液體積約150ml。先將吸收液取下,再停止加熱。
(2)半微量水蒸汽蒸餾法 上述試樣的消煮液冷卻,加蒸餾水20m1轉(zhuǎn)入100ml容量瓶,冷卻后用水稀釋至刻度,搖勻,為試樣分解液。取2%硼酸溶液20ml,加混合指示劑2滴,使半微量蕉餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液;蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴,硫酸數(shù)滴,且保持此液為橙紅色,否則應(yīng)補(bǔ)加少許硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10~20ml注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中,用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口,塞好入口玻璃塞,再加10ml40%氫氧化鈉溶液,小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室,將玻璃塞塞好,并在入口處加水封密好,防止漏氣,蒸餾4min,使冷凝管末端離開(kāi)吸收液面,用蒸餾水洗冷凝管末端,洗液均流入吸收液。
3、滴定 用硼酸吸收氨后,立即用0.05mol