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凱氏定氮法的實驗原理是什么?
凱氏定氮法是通過測出樣品中的總含氮量再乘以相應的蛋白質系數而求出蛋白質的含量,此法的結果稱為粗蛋白質含量。
原理:有機含氮化合物與濃硫酸共熱消化,氮轉化為氨,再與硫酸結合成硫酸銨。硫酸銨與強堿反應,放出氨。將氨蒸餾到過量的標準無機溶液中,再用標準堿溶液進行滴定。根據測得的氨量,計算樣品的總氮量。、試劑與材料:濃硫酸、硫酸鉀-硫酸銅粉末(稱取80g硫酸鉀和20g硫酸銅(五水),0.3g二氧化硒研細混合)、30%氫氧化鈉溶液、2%硼酸溶液、0.01M標準鹽酸、混合指示劑(田氏指示劑)儲存液(取50ml0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅溶液混合,儲存于棕色瓶中備用。
賽亞斯凱氏定氮儀概述:
KDN凱氏定氮儀是依據經典(凱氏定氮)方法設計的自動測氮蒸餾系統(tǒng)。儀器主要工作流程有:自動加水(含自動水位檢測功能)、自動加堿(按鈕控制)、手動加酸(手工配置)、自動蒸餾(按鈕控制)等幾部分。該儀器操作簡單;使用安全、可靠;省時、省力;適用于糧油檢測、飼料分析、植物養(yǎng)分測試、土肥檢測、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的分析、教學及研究中,是操作使用人員的理想工具。2.工作原理 (凱氏原理):
蛋白質是含氮的有機化合物。食品和硫酸及催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后在堿化蒸餾作用下使氨游離,釋放出來的氨氣和水蒸氣一起經過冷凝管冷凝后,進入裝有硼酸的錐形瓶中。被硼酸吸收后再用硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,即得到蛋白質含量。
2.1.(消化爐部分)有機物中的銨根在強熱和催化劑及濃H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反應式為: 2NH2-+H2S04+2H+=(NH4)2S04
2.2.(蒸餾器部分)裝有消化后樣品的消化管在高溫蒸汽作用下與堿作用,放出NH3 和水蒸氣,收集于H3BO3 溶液中
反應式為: (NH4)2SO4+2NaOH高溫蒸汽=2NH3↑+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
2.3. (滴定部分)用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,根據HCI消耗量計算出氮的含量,然后乘以相應的換算因子,得到蛋白質的含量
反應式為: (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
3.操作步驟:
取樣→ 消化 → 蒸餾→ 滴定 → 計算
4.整套儀器組成:
含消化爐(本公司供選配KDN-04C、KDN-08C、KDN-20C等消化爐型號)和KDN系列凱氏定氮儀蒸餾器組成。
二.技術參數
1.測定品種:糧食、飼料、食品、乳制品、飲料、土壤、水、藥物、沉淀物和化學品等。
2.工作方式:半自動。
3.測定數量:采用單個連續(xù)蒸餾測量。
4.測定范圍:含氮在0.1~200mgN(毫克氮) (含氮量0.1%~99%)
5.回收率:≥99%(相對誤差,包括消化過程)
6.重復率:相對標準偏差<±1%
7.工作時間:蒸餾時間5-15分鐘( 根據樣品和含氮量的不同而定)
8.額定電壓: 220V/50Hz。
9. 額定功率:800W
10.冷卻水消耗: 3-4L/min(水溫低于25度)