【原理概述】

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，特殊修饰的反转录酶利用特异性引物和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链 DNA 结合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA 链为模板进行快速核酸扩增反应。依赖nfo 酶的作用，加入根据模板设计的特异的分子探针，使用胶体金技术（三明治夹心法）可以对最终结果进行检测。

【产品特点】

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需 12 min）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买 PCR 扩增仪等价格高昂的专属设备。

【引物设计】

建议使用长度在 30-35 bp 的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；下游引物的 5’端标记一个修饰基团（常用生物素）。引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩增

子长度建议在 150-500 bp。

【荧光探针设计】

在上下游引物中间，设计一段长度为46-52nt与目的片段互补的序列；5’端修饰一个抗原标记（典型 FAM）;在 5’端和 3’末端的中部位置标记一个 dSpacer（四氢呋喃，THF），作为 nfo 的识别位点；3’末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer 等。

【试剂盒组成】

注：考虑到核酸降解问题，RNA 系列产品不提供正对照模板和引物探针。

【试剂盒储存】

1．运输温度：≤ 20 oC的恒温环境；

2．储存条件：储存温度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒温环境，避光保存，避免重压、反复冻融；

3．产品有效期：14个月；

4．生产日期见外包装。

【注意事项】

1. 由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免核酸污染，并设置空白对照；

2. 使用时请取出实验所需的 MIRA 反应单元的数量，剩余部分请置于存储条件下。