RPA(recombinase polymerase amplification)即重组酶聚合酶扩增技术，在ATP存在条件下，重组酶与引物结合, 形成蛋白-核酸聚合体，并搜索配对目标；当引物寻找到配对DNA模板，ATP水解供应能量，重组酶离开引物，并在DNA聚合酶的作用下合成新DNA链；同时，单链DNA结合蛋白( SSB)同被置换出来的DNA单链进行结合，防止DNA模板再次形成双链。RPA实验能在恒定温度下进行全程实验，没有复杂的操作，对仪器及人员的要求不高，适合基层或现场快速诊断。

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RPA等温扩增原理

1. 复合物A能够在单链上寻找同源序列，并连接成环状分子。

2. 单股DNA结合蛋白可以与单链DNA结合，防止其二级结构形成，并引导聚合酶与模板结合。

3. DNA聚合酶负责在模板上合成新链DNA。

RPA的优势在于其等温反应、快速扩增和鲁棒性，这使其非常适合POCT检测。

RPA具有以下主要特征

1. 等温反应

RPA反应在常温(37-42°C)下进行，不需要热循环设备，这使其可以应用于简易的POC诊断装置中。

2. 快速反应

RPA反应只需要20-40分钟，比PCR快几倍，这可实现病原体 DNA的快速检测。

3. 强大的扩增效率

RPA可以从少量模板DNA复制出109-1011个拷贝，扩增效率高达90%。

4. 高度特异性

RPA使用三个核酸酶(活动的复合体A、单股DNA结合蛋白及DNA聚合酶)实现序列特异性扩增，可检出少至几个拷贝的目标DNA。

5. 鲁棒性

RPA可以在各种样本中直接扩增(不需DNA精制)，对PCR的常见阻碍因素如血清、肉汤等也具有很好的耐受性。

6. 灵活性

RPA可直接从各种原始样本中扩增DNA，也可以与其他技术如磁珠分离等结合，实现样本的预处理。

RPA与PCR相比具有以下主要优势

1. 等温反应

RPA在常温下进行，而PCR需要进行多轮的温度变化循环，需要PCR仪等设备。RPA的等温反应更简单，不需要昂贵设备，这有利于POC检测的应用。

2. 速度更快

RPA反应只需20-40分钟，而PCR通常需要2-3小时。RPA可以实现病原DNA的快速检测，适用于临床急症检测。

3. 更高扩增效率

RPA可以得到109-1011拷贝的扩增产物,扩增效率高达90%,而PCR的扩增效率一般在80-90%之间。

4. 鲁棒性更强

RPA可以直接从各种原始样本扩增，而PCR更加敏感，常需进行DNA精制或分离。RPA对PCR的常见干扰因子也更具耐受性。

5. 不产生二级片段

RPA扩增产物为单一片段,而PCR可能产生二级扩增片段,影响结果的准确性。

RPA也存在一定局限

1. 目前报道较少：与PCR相比，RPA的研究报道和应用案例还比较少，相关技术和产品也较不成熟，有待进一步推广。

2. 专一性较差：RPA的扩增效率高，但其对非靶DNA的扩增也较PCR更明显，这会产生更高的假阳性信号，影响检测精度。

3. 扩增片段较长：RPA获得的扩增片段一般在100-1500bp之间，较PCR获得的产物长，不利于某些下游检测。

4. 定量性较弱：与实时荧光PCR相比，RPA的定量能力较差，不利于获得准确的DNA定量结果。

RPA相比PCR，由于其等温、快速、高效和鲁棒等优势，更适用于简易POCT检测的应用。但其专一性较差、扩增片段较长和定量性较弱等也是不容忽视的局限因素。