小鼠牙乳頭細(xì)胞介紹

小鼠牙乳頭細(xì)胞分離自牙乳頭組織；牙乳頭細(xì)胞來源于外胚間充質(zhì)，具有多向分化潛能，是體內(nèi)分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞，該細(xì)胞在牙發(fā)育和牙體牙髓損傷修復(fù)過程中起重要作用。牙乳頭細(xì)胞為未分化的間充質(zhì)細(xì)胞，有少量微細(xì)的膠原纖維分散在細(xì)胞外間隙。在鐘狀期，被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多，并出現(xiàn)細(xì)胞的分化。在內(nèi)釉上皮的誘導(dǎo)下，牙乳頭外層細(xì)胞分化為高柱狀的成牙本質(zhì)細(xì)胞。這些細(xì)胞在切緣或牙尖部為柱狀，在牙頸部細(xì)胞尚未分化成熟，為立方狀。牙乳頭在牙發(fā)育中有重要作用?，F(xiàn)已證明，牙乳頭是決定牙形狀的重要因索。例如，將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合，結(jié)果形成磨牙；與此相反，切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合，結(jié)果形成切牙。牙乳頭還可以誘導(dǎo)非牙源性的口腔上皮形成成釉器。

本公司生產(chǎn)的小鼠牙乳頭細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞純度可達(dá)85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

小鼠牙乳頭細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。