当前位置:上海淳麦生物科技有限公司>>技术文章>>*0 感受态细胞产品说明书
产品规格(CAT#: DL1010)
*0: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
产品说明
*0菌株来源于MC1061菌株,是目前实验室常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型,而*0为galU型)。*0生长速度快 (比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆,recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取??捎糜诠菇寺?,蓝白斑筛选等实验。*0感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。
操作方法
1. *0感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质?;蛄硬? 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13 h。
注意事项
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质?;蛄硬锸庇η崛岵僮?。
3. 转化高浓度的质?;蚵实牧硬锟上嘤跎僦沼糜谕堪宓木?。
上海淳麦生物科技有限公司 4006815880
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