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日本生研 假结核耶尔森菌属检测用诊断血清
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一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度。 A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。A代表吸光值,而OD是光密度值,一个意思。
核酸的纯度可以根据OD260/OD280的比值进行判断,纯度高的DNA其OD260/OD280在1.8~2.0之间,低于此范围表明蛋白质含量超标,高于此范围表明样品中含有RNA。
理论上,纯的RNA情况下:OD260/OD280的值为2,纯的DNA情况下:OD260/OD280的值为1.8。样品中如果含有蛋白质及苯酚,OD260/OD280比值会明显下降。对于纯的样品,只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。
OD260/OD280=1.9~2.0 RNA居多,纯度已经很高了。
纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)
RNA:1.7 <OD260/OD280<2.0(<1.7时表明有蛋白质或酚污染;>2.0时表明可能有异硫氰酸残存)。
在合成引物时,公司通常要求标注合成引物的浓度,通常用OD值表示,如1OD、2OD、5OD等。对于初学者平说,可能不知道这里OD值代表的意义是什么。
其实OD (optical density)值即光密度值。DNA采用紫外吸光谱法定量,一个OD值的定义为在260nm波长下,1ml体积水溶液,1cm光程,吸光度为1A。
合成引物时,为了确定引物浓度,可以在260nm波长下(OD260)测量吸光度,然后使用光吸收值和微摩消光系数的倒数(nmol/OD),通过Beers法则计算出引物浓度。
通常1个OD值的合成引物DNA的质量约为33ug,即1 OD260= 33 ug/ml。