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日本生研 单核细胞增生李斯特菌O群诊断血清

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4. 加入10 ml 预冷的Buffer P3，轻轻颠倒混匀，直到蓝色全部消失，出现白色蛋白沉淀，冰上放置20min。（此步发生酸碱中和反应，pH值降低，使变性的DNA双链结构恢复，其中的SDS可以充分与蛋白质结合，使其析出）
5. 20 min后，6000 g 4℃离心25min。同时，向柱子中加入5ml Buffer QBT，使其全部流过柱子，平衡柱子。如果是重复使用的柱子，先使其中的HCl全部流尽，然后加满DDW清洗2遍柱子，后再加入Buffer QBT平衡柱子。
6. 剪一小块纱布，折叠4层，放于柱子上部。将离心后的液体缓慢倒入纱布中，后挤压纱布使其中的液体全部直接过滤到柱子中，使其充分流过柱子。（如果此步不只1个质粒时，挤压不同质粒的纱布时，一定要换手套，避免污染质粒）
7. 清洗柱子: 液体全部流过柱子后，向柱子中直接加满Buffer QC，使其全部流过柱子，清洗2遍，弃去废液。
8. 洗脱质粒: 向柱子中加15ml Buffer QF，靠重力作用使其全部通过柱子，收集洗脱液。(注：要收集到一个新的管中)
9. 沉淀质粒：向收集的液体中，加入0.7倍体积（即10.5 ml）异丙醇，轻轻混匀，6000 g 4℃离心25 min。（异丙醇可以充分沉淀质粒，但同时会沉淀很多盐分）
10. 清洗质粒：离心后，注意质粒贴壁的方向，应从其侧面倒掉废液。然后加入10 ml 70%的乙醇，轻轻晃动（不能用枪吹散，否则会损失很多质粒）。