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制作劃痕實驗需要注意事項
閱讀：830 發(fā)布時間：2023-12-4傷口愈合試驗，也通常稱為“劃痕試驗"，是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。細(xì)胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細(xì)胞上人為一個空白區(qū)域，稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。
條件好的實驗室可以使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。
通常，用于傷口愈合試驗的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
條件好的實驗室可以使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。
通常，用于傷口愈合試驗的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
制作劃痕實驗需要注意：
1. 細(xì)胞的密度；劃痕實驗一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合，但是每種細(xì)胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細(xì)胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時間，細(xì)胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好，建議是100%的鋪滿。
2. 用槍頭畫線時盡量垂直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線。
3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細(xì)胞。
4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基，因為：劃痕后用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，意在說明在監(jiān)測的 24 小時內(nèi)，劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果，所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到蕞低；但若細(xì)胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。
5. 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。可按0，10，12，15時間點取樣，拍照(具體時間依實驗需要而定)。
6. 統(tǒng)計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計算細(xì)胞間距離的平均值。