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細(xì)胞進行爬片流程及注意事項
閱讀：3105 發(fā)布時間：2022-3-1在做免疫熒光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測（TUNEL）時，免不了要制備細(xì)胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。現(xiàn)就如何制備好的細(xì)胞爬片介紹。
細(xì)胞進行爬片操作流程：
1. 胰酶消化細(xì)胞后計數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中（懸浮細(xì)胞直接離心）。
2. 加細(xì)胞時，根據(jù)玻片的大小，先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時玻片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片。整個過程注意無菌操作。
3. 根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
保存細(xì)胞爬片時，一般用培養(yǎng)皿或避光濕盒，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片，這樣方便做實驗時取片。然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標(biāo)記，為避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒有問題的。
細(xì)胞進行爬片注意事項：
1. 使用細(xì)胞爬片時（比如在六孔板中放入爬片，六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分，加細(xì)胞懸液時常常就是細(xì)胞鋪滿整個孔底，有時細(xì)胞生長邊集現(xiàn)象，就是靠近壁邊緣密度要高些，這樣處于中央玻片上爬的細(xì)胞數(shù)量就可能相對較少）。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后，加細(xì)胞懸液時只滴到玻片上，一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣。
2. 按照實驗設(shè)計，作用一定時間后取玻片。注意細(xì)胞不能太密，否則容易掉片。