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不同蛋白提取液對動(dòng)物組織全蛋白質(zhì)組鑒定的影響
閱讀：405 發(fā)布時(shí)間：2019-4-20| 提 供 商 | 上海斯邁歐分析儀器有限公司 | 資料大小 | 570.6KB |
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目前利用高分辨質(zhì)譜儀能夠?qū)?xì)胞的全蛋白質(zhì)組進(jìn)行深度覆蓋，鑒定細(xì)胞內(nèi)接 近全蛋白質(zhì)組的蛋白數(shù)目[1-3]，同時(shí)對于多種生物學(xué)過程中所涉及的翻譯后修飾 也能進(jìn)行深度的鑒定和定量[4]。質(zhì)譜儀的能力和樣品前處理是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的兩 大重要因素，本文主要分析樣品前處理過程中不同蛋白提取液對動(dòng)物組織全蛋 白質(zhì)組鑒定的影響
細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)提取一般采取機(jī)械和物理兩種方法相結(jié)合。傳統(tǒng)的機(jī)械裂解 如研磨、反復(fù)凍融、超聲與溶液內(nèi)剪切等對細(xì)胞進(jìn)行破碎，為了提高蛋白提取 效率，機(jī)械裂解的同時(shí)加入表面活性劑或變性劑，破壞細(xì)胞及細(xì)胞器脂膜同時(shí) 增加蛋白溶解度[5]。常用的表面活性劑分為離子型、兩性離子型和非離子型三大 類，常添加的非離子型表面活性劑有 Triton X-100 和 NP-40 二者可使蛋白質(zhì) 小化變性；離子型的表面活性劑 SDS，可*溶解細(xì)胞膜，蛋白提取效率高， 但蛋白質(zhì)*變性失活。常用的蛋白變性劑如尿素和鹽酸胍，能夠斷裂蛋白氫 鍵，使蛋白發(fā)生不同程度的變性，同時(shí)增大疏水氨基酸殘基在水相中的溶解度。 因此根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、樣品類型以及樣品量選擇合適的機(jī)械裂解與蛋白提取液， 將有助于提高蛋白質(zhì)組研究的深度
液相色譜儀：EASY nLC1000（ThermoFisher Scientific）
分析柱：自制 C18 納升級噴針柱，長度 15 cm，
內(nèi)徑 75 µm，粒徑 3 µm
流動(dòng)相：A，0.1% 甲酸 / 水；B, 0.1% 甲酸 / 乙腈