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技術(shù)文章

高效液相色譜-熒光檢測法測定飼料中的乙氧酰胺苯甲酯

閱讀:894          發(fā)布時間:2021-7-26

前言:乙氧酰胺苯甲酯,又名衣索巴,俗名球蟲酯,是尼卡巴嗪和氨丙啉等抗球蟲藥的增效劑。該藥品抗球蟲作用及機理與磺胺藥和抗菌增效劑相同,本身具有抗原蟲活性,它通過干擾四氫葉酸的合成阻止裂殖體的正常發(fā)育,從而產(chǎn)生抗球蟲作用。2020 年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第 316 號-6-2020 飼料中乙氧酰胺苯甲酯的測定 高效液相色譜法正式頒布。本文所述方法以此標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ),重點優(yōu)化了前處理流程。本方法采用 AgilentBond Elut AL-N 柱對樣品進(jìn)行萃取和凈化,并利用安捷倫 Poroshell 120 SB-C18 色譜柱對目標(biāo)物進(jìn)行快速分析,熒光檢測器進(jìn)行檢測,方法檢測限為 0.0048 μg/g,定量限為 0.016 μg/g。該方法簡化了公告標(biāo)準(zhǔn)中的前處理方法,在一定程度上節(jié)約了分析成本,提高了分析效率。對于基質(zhì)更為復(fù)雜的飼料樣品,仍需參考農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第 316 號-6-2020 所規(guī)定檢測方法。

乙氧酰胺苯甲酯的分析樣品前處理及分析條件取飼料樣品 5 (±0.05) g,于 50 mL 離心管中。根據(jù)生產(chǎn)實際需要,按照表 1 所示添加水平,向飼料樣品中添加乙氧酰胺苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)品,制備得到加標(biāo)樣品,用于考察方法的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度。

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加標(biāo)后,將飼料混合均勻,靜置過夜。加入 20 mL 乙腈萃取,渦旋混合 1 min,超聲 10 min,5000 r/min 離心后取 10 mL 上清液在 30–40 °C 下氮吹近干;復(fù)溶于 5 mL 正己烷:丙酮 (v/v, 9:1)中;渦旋混合 1 min,超聲 10 min,5000 r/min 離心 10 min,上清液經(jīng)過 Bond Elut Al-N SPE 柱進(jìn)行凈化處理(SPE 流程見圖 1);接收洗脫液,氮吹近干后,用 1 mL 甲醇重新定容,供LC-FLR 檢測,分析條件如表 2 所示。每個加標(biāo)樣品分別做三個平行樣品進(jìn)行測定。


色譜分析條件的優(yōu)化色譜分析采用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱,在普通液相色譜儀上可以實現(xiàn)快速分析。8 min 內(nèi)即可完成整個方法的運行。由圖 4 可以看出,連續(xù)進(jìn)樣 6 針,色譜圖基本*重合,表明方法具有重復(fù)性。在 0.1–20.0 μg/g 范圍內(nèi),儀器具有良好的線性,線性相關(guān)系數(shù) R2 為 0.9989,見圖 4。


結(jié)論本方法基于 Agilent Bond Elut AL-N SPE 柱,結(jié)合 Poroshell 120SB-C18 快速色譜柱,在普通液相色譜儀上實現(xiàn)了對飼料中乙氧酰胺苯甲酯的含量分析。方法準(zhǔn)確度和精密度均可達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求,同時簡化了前處理方法,大大提高了分析效率。該方法適用于實際生產(chǎn)中飼料中乙氧酰胺苯甲酯含量的測定。


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