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戴安離子色譜分離紫外檢測器測定磺達肝葵鈉
閱讀：758 發(fā)布時間：2019-10-9引言：磺達肝葵鈉（Fondaparinux sodium，又稱Arixtra）是一種新型的全合成 抗凝血藥物。它的結構中含5個糖單元，每個糖單元上都結合了磺酸基團，分 子量為1728道爾頓。磺達肝葵鈉是一種高選擇性Xa因子抑制劑，主要通過抗 凝血酶（ATⅢ）對Xa的特殊抑制而發(fā)揮療效。在預防下肢深靜脈血栓形成和 肺栓塞的有效性和安全性方面的研究，已證實它的作用跟低分子肝素相同， 或優(yōu)于低分子肝素?；沁_肝葵鈉具有生物利用度高,起效快,半衰期長、不良反 應少等特點，在臨床上常用作手術后抗凝血；以及深度靜脈血栓病癥，防止 血液凝固，抑制血栓形成；也用于治療急性冠脈綜合征。
磺達肝葵鈉具有很強的極性，在常規(guī)反相C18柱上幾乎沒有保留；用戴安離子色譜分析，淋洗液濃度很高無法用電導檢測?；沁_肝葵鈉本身的結構特點使得 其定量分析和有關物質(zhì)檢測成為一個難題。本文建立了離子色譜法分離、紫外 檢測器檢測磺達肝葵鈉及其有關物質(zhì)的方法，且干擾少，重現(xiàn)性好。
測試條件-儀器：ICS-5000戴安離子色譜儀（Thermofisher公司），配梯 度泵， VWD3100紫外檢測器，AS自動進樣器 色譜柱： CarboPac PA1 保護柱（ 1 0 . 0 µ m , 50×4 mm，P/N: 035391） CarboPac PA1 分離柱（ 1 0 . 0 µ m , 250×4 mm，P/N: 043096）； 柱溫：30 ℃； 淋洗液：A：DMSO溶液（10 µL溶于1.0 L去離子水）， B：2 mol/L NaCl，梯度淋洗； 流速：1.0 mL/min； 定量環(huán)：100 µL； 檢測方式：紫外波長210 nm。
樣品前處理 樣品經(jīng)過0.22 µm尼龍濾膜過濾后，直接上機分析。結果和討論 色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化 磺達肝葵鈉的結構中含有五個糖單元結構，每個糖單 元上又結合了多個磺酸根，這兩種結構使磺達肝葵鈉具有 很強的極性，在常規(guī)反相C18柱上幾乎沒有保留；而解離 的磺酸根使其在離子交換色譜柱上有所保留，這種保留是用戴安離子色譜分析磺達肝葵鈉的前提。同時由于多個磺酸根 的存在，磺達肝葵鈉所帶電荷較多，在離子交換色譜柱 上保留很強，需要使用高濃度的鹽溶液才能將其從洗脫 下來。本實驗選用了柱容量適合的CarboPac PA1保護柱 和分析柱，低濃度DMSO溶液和2 mol/L NaCl溶液梯度淋 洗，在所用色譜條件下（如表1），磺達肝葵鈉與其有雜 質(zhì)具有良好的分離度（如圖1）。因Cl會對不銹鋼造成銹 蝕，本實驗使用的高濃度NaCl淋洗液適合于全peek材質(zhì) 的離子色譜。
離子色譜常用的檢測器有電導檢測器、紫外檢測 器、安培檢測器等?；沁_肝葵鈉的結構中有五個糖單 元，理論上在安培檢測器上有明顯響應值應，但結構中 磺酸基團大大降低了該化合物在安培檢測器上的靈敏 度，且高濃度的Cl也會導致安培檢測器中毒；如果采用 電導檢測器，高濃度的NaCl溶液使樣品的電導信號淹沒 在淋洗液的高背景中，無法檢測到信號。選擇紫外檢測 器的原因有兩點：首先，磺酸根基團本身具有較好的末 端吸收，磺達肝葵鈉是全化學合成的，樣品純度較高， 末端基本無吸收，不會造成對磺達肝葵鈉的干擾；同時 調(diào)整DMSO的用量，可以降低由于淋洗液梯度造成的基 線漂移。
重現(xiàn)性、線性和靈敏度 吸取濃度為5.0 mg/L的磺達苷葵鈉混合標準溶液，重 復進樣7次，記錄色譜圖，它們保留時間的相對標準偏差 分別為0.41%，峰面積的相對標準偏差分別為1.60%，峰 高的相對標準偏差分別為1.0%，重現(xiàn)性較好。 將標準品定量混合并用標準品溶液稀釋得到一濃度 系列，對上述系列濃度各測定3次后, 取其峰面積的平均 值，以峰面積為縱坐標，標準液質(zhì)量濃度為橫坐標建立 標準工作曲線，磺達肝葵鈉檢出限為50 mg • L-1，在250- 2000 mg• L-1濃度范圍內(nèi)，相關系數(shù)為0.9993， RSD為 3.6%，加標回收率為91%。
結論：戴安離子色譜法分離紫外檢測器測定黃達肝葵鈉及其有 關物質(zhì)，方法簡便、穩(wěn)定，線性范圍內(nèi)相關性好，準確 度高，受其他因素干擾小，具有較高的實用價值。