亚洲精品综合日韩中文字幕网站_精品综合久久久久97_中文在线天堂网www_久久精品免费一区二区三区_91久久国产综合精品女同国语_久久资源总站在线国产成人

探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将BBoxiProbe® O06荧光染料1000-2000倍稀释，配制成探针染色工作液。

探针标记
原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。
1、 培养板/培养皿准备细胞样本。
2、 待细胞生长到合适丰度，去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3、 加入适量体积37℃预热的含O06探针工作液。
4、 在37℃细胞培养箱内于生长状态下避光孵育20分钟～40分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
5、 移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。以充分去除未进入细胞内的O06探针。
6、 加入200 μL HBSS缓冲液。
7、 荧光酶标仪、荧光显微镜（含合适滤片）检测。最大激发/发射波长为488 nm / 516 nm。

收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 离心，吸除上清培养基。
2. 用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后重悬浮于稀释好的37℃预热的O06探针工作液中，细胞浓度为1*106-2*107/毫升。
4. 于生长状态下37℃细胞培养箱内避光孵育20-30分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
5. 离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。以充分去除未进入细胞内的O06探针。
6. 用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
7. 用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测。
最大激发/发射波长为488 nm / 516 nm。

活性氧检测：
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测，或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜，直接拍照分析（需要有相关的荧光强度分析软件）。
2. 或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
3. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以（需要有相关的荧光强度分析软件）。
4. 使用488 nm激发波长，520 nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
探针O06的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测。
5. 荧光强度强，活性氧含量高。