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目录:上海贝博生物科技有限公司>>蛋白质生物学>>蛋白提取和裂解>> 细菌胞质蛋白提取试剂盒

细菌胞质蛋白提取试剂盒
  • 细菌胞质蛋白提取试剂盒
参考价 面议
具体成交价以合同协议为准
参考价 面议
具体成交价以合同协议为准
  • 品牌 贝博生物
  • 型号
  • 厂商性质 生产商
  • 所在地
属性

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更新时间:2025-07-25 07:42:12浏览次数:211评价

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产品概述 product description 贝博® BBproExtra® 细菌胞质蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取胞质蛋白,包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。提取过程简单方便。本试剂盒含有的配方能够有效裂解细菌组份,试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存??鞘褂煤?20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
细菌
产品特点
1.使用方便,从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
2.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
5.本品可用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
6.本品不含EDTA,可以用于金属螯合层析等下游应用。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项:
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
? 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
? 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
使用方法
1. 提取液制备:
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。
2. 离心收集需要提取蛋白的菌体,用PBS洗菌体2次。
3. 按每100-150mg湿重菌体样本加入500ul冷的提取液A(大约菌体和提取液体积比1:3-1:5,淹没菌体即可),吹打混匀,在2-8℃振荡1-2小时,至菌体裂解,菌体沉淀减少。
4. 将菌液在2-8℃低温下12000g离心5分钟,取上清。
5. 在37℃水浴10分钟。
6. 在37℃, 1000g离心3分钟。
7. 此时液体分为2层,小心吸取上层溶液,即为胞质蛋白。
8. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析

1.蛋白浓度低?
细菌蛋白丰度较低,需要尽可能加大细胞上样量。处理部分样本时可能没有裂解,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Gang Zhou, Qing-shan Shi, et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics Volume 133, 5 February 2016, P134–143 (IF=3.888)

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