使用方法
血液樣品:
1. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。
2. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解1-2分鐘已經足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至4-5分鐘,并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。
3. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現紅細胞裂解不,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數等后續(xù)實驗。 組織細胞樣品:
1. 新鮮組織經過膠原酶或等消化處理,通過適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
2. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現紅細胞裂解不,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清??稍僦貜?次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數等后續(xù)實驗。