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ELISA免疫分析操作要点
阅读：160 发布时间：2024-4-22ELISA免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法，酶联免疫吸附分析（下称ELISA）是免疫分析的一种，分三个部分组成：免疫识别，信号输出和数据处理。
操作步骤:免疫识别是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗体，而后利用抗体识别待测的抗原（通常是疾病的蛋白质生物标记物，病毒，细菌等等，从复杂待测液中将抗原吸附到96孔板表面。接着用带有辣根过氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）、荧光或放射性标记的抗体通过直接或者间接的方式输出识别信号。最后利用信号强度，标准样品浓度梯度等信息计算得出待测样中目标抗原的浓度。
操作要点：
1、标本
对于血清标本，采集血液时需注意溶血。此外，为避免细胞裂解释放出目标检测分子影响实验，检测物宜进行离心去除细胞成份。
2、加样
注意将所加物加至板孔底部，避免加在孔壁上部，不可溅出或产生气泡。加不同物质时应更换枪头，以免发生交叉污染。另外在显色时，最好使用排枪迅速完成加液过程，以减少反应时间不一致引起的孔间差异。
3、稀释
在稀释过程中,要注意使用同一微量加样器、同一类枪头和容器,保证所稀释液体容量一致。
4、孵育
37℃恒温箱孵育时，酶标板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,最后将酶标板放在湿纱布上，并且酶标板不能叠放,以保证各板的温度能迅速平衡。孵育时间一般为1～1.5h，不宜过长。如采用4℃孵育,则应将酶标板包好,以免试剂与外界反应或蒸发。
5、洗涤
应严格按要求洗涤,保证洗涤液注满各孔,洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干,并应严格遵守洗涤时间,不得马虎。
6、显色
显色液量不可过多，加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。
7、读板
比色前应先用洁净的吸水纸拭干酶标板底附着的液体,以减少比色受干扰,然后
将板正确放入酶标仪的比色架中。酶标仪应安置在避光环境下,操作室温宜在15～30℃,在使用前应先预热酶标仪15-30分钟,这样测定结果更加稳定。