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ELISA实验间接法试剂及试剂配制

阅读:369          发布时间:2023-2-15

ELISA实验间接法试剂及试剂配制:

1. 抗原及酶标记抗体
抗原: IgG

酶标抗抗体:羊抗鼠IgG-HRP

2.包被液(CBS):Na2CO3   0.8gNaHCO3  1.46g,水溶解,定容500ml


3. 封闭液(3BSA+CBS 5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA。含5%荷兰牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。

4. 洗涤液(PBST 10*):KH2PO4   4g,Na2HPO4·12H2O    58gNaCl   160g, KCl  4g,Tween-20 10mL  加水定容2L

5. 洗涤液(1*PBS): PBSTH2O=19


6. 底物溶液(4甲基酰苯氨)
①TMB
底物缓冲液(0.005mol/LPH3.6醋酸钠-柠檬酸缓冲液):称NaAc·3H2O1.13g,C6H8O7·H2O 1.05g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,调PH=3.6。
② TMB
底物液:称3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB0.08g 溶于40mL 二甲基亚砜(DMSO)中,加60 mL 甲醇,混匀,加100mL 底物缓冲液,在暗处避光搅拌2小时至溶解,4℃避光保存。
③H2O2 
底物液:取140μL过氧化氢(H2O2)加入200mL底物缓冲液混匀。
底物应用液:现用现配,TMB:H2O2=1:1混匀。

7. 终止液:2mol/L H2SO4


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