技术文章
ELISA实验间接法试剂及试剂配制
阅读:369 发布时间:2023-2-15ELISA实验间接法试剂及试剂配制:
1. 抗原及酶标记抗体
①抗原: IgG
②酶标抗抗体:羊抗鼠IgG-HRP
2.包被液(CBS):Na2CO3 0.8g,NaHCO3 1.46g,水溶解,定容500ml。
3. 封闭液(3%BSA+CBS 或5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA。含5%荷兰牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。
4. 洗涤液(PBST 10*):KH2PO4 4g,Na2HPO4·12H2O 58g,NaCl 160g, KCl 4g,Tween-20 10mL 加水定容2L。
5. 洗涤液(1*PBS): PBST:H2O=1:9
6. 底物溶液(4甲基酰苯氨)
①TMB底物缓冲液(0.005mol/LPH3.6醋酸钠-柠檬酸缓冲液):称NaAc·3H2O:1.13g,C6H8O7·H2O :1.05g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,调PH=3.6。
② TMB底物液:称3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)0.08g 溶于40mL 二甲基亚砜(DMSO)中,加60 mL 甲醇,混匀,加100mL 底物缓冲液,在暗处避光搅拌2小时至溶解,4℃避光保存。
③H2O2 底物液:取140μL过氧化氢(H2O2)加入200mL底物缓冲液混匀。
④底物应用液:现用现配,TMB:H2O2=1:1混匀。
7. 终止液:2mol/L H2SO4