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                     黑化大家鼠肺成纤维细胞；NRm操作流程

已是十一月末。一年又快到头了?；匾淝客蚵迫缪涛礴匀?，即使我用文字频繁的记录下生活的种种镜头，也握不紧，抓不住它。许多琐碎和细节，无法用任何形式表达，唯有腐烂成尸骸，消融在远去的岁月里。接下来介绍   黑化大家鼠肺成纤维细胞；NRm操作流程

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。

冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

操作步骤 :

　　1、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 　　

2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 　　

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。 　　观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。 　　

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 　　附：消化液配制方法： 　　称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。