亚洲精品综合日韩中文字幕网站_精品综合久久久久97_中文在线天堂网www_久久精品免费一区二区三区_91久久国产综合精品女同国语_久久资源总站在线国产成人

  在ELISA试剂盒操作过程中总是会出现一些常见的问题，比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。今天进口elisa试剂盒为大家带来了一些实验经验总结，教您这样操作ELISA试剂盒实验不会失败。

   1.有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，请看以下几个方法：
    2.亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
    3.小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以 被其识别，所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。
    4.脂类物质：可将其在有机溶剂中溶解后加入Elisa板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。 

5.进口elisa试剂盒应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间 的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易 吸附到固相载体表面。

    6.但选用什么，要依据试验详细来实践。常用封suo剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使 用(5%－10%)；还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。封suo就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲， 从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封suo：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
    7.在洗板时会有一定误差，人为因素很大当然有前提的用洗板机除外，洗的不*或串了孔，对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于 聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干 扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板：可以说在ELISA操纵中，洗涤是zui主要的枢纽技术。
    8.加抗体标本(和二抗)：注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度， 太高浪费，太低则着色浅。
    9.显色：显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加 叠氮钠。
    10.每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好分析。