大鼠子宫内膜上皮细胞

一、细胞基本属性

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

传代比例：1:2

细胞简介：大鼠子宫内膜上皮细胞分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂。子宫内膜即黏膜，由上皮(属单层柱状上皮，有分泌细胞和纤毛细胞二种)和固有膜(由结缔组织构成，其内有大量的星形细胞，称为基质细胞)组成，子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层，功能层较厚，约占内膜厚度的4/5；基底层较薄较致密，约占1/5，功能层可剥脱，而基底层不可剥脱。子宫内膜上皮细胞主要功能：①子宫内膜亦称子宫黏膜，是指构成哺乳类子宫内壁的一层；②子宫内膜对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期(发情周期、月经周期)发生显著的变化。子宫内膜与胚胎附植密切相关，在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎与母体“对话"的过程中，子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的内层，位于子宫腔面，在动物生殖生理活动中占有重要地位。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官，子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
原代细胞分离培养的思路：

取材--分离--培养--鉴定

首先将组织从机体中取出，经胰dan白酶/胶原酶处理后分散成单细胞，再在合适的培养基中培养，使细胞繁殖到一定系数后进行细胞鉴定。

实验步骤：

一、取7-10d雄性SD大鼠，颈椎脱臼处死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超净工作台中，将大鼠断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中，去除小脑和间脑。

三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管，再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。

四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜，保留大脑皮质。

五、大脑皮质放于DMEM中，剪碎成约1mm3大小，放入50ml的离心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型胶原酶，0 .025-0 .05％IV型胶原酶，200-400U DNaseI)，混匀后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室温1 000×g离心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重悬浮，充分混匀，1 000×g，20min，4℃离心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的胶原酶/分散酶，0.05-0.1％I型胶原酶，100-300U DNaseI )重悬浮，混匀，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室温离心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀，铺于经离心形成连续梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃离心10min。

十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后DMEM漂洗两次(离心1000×rpm，6min，室温)，去上清液。

加入DMEM培养液(20％FBS，4ug/ml素 )重悬浮，接种于含5％的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中，置于37℃、5％CO2培养箱内静置培养24h后更换不含素的混合培养基，随后隔天换液。

注意事项：

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，yi酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
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