详细介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称 | 规格 | 货号 |
48T 0.2PCR管 | FS-02R6625 |
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例) 1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。 2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。 3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。 4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 | 二、样品DNA的制备 8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取, 多出的一个是PC(样品制备阳性对照), 一个是NC(样品制备阴性对照)。 可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。 9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒。 | 三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行) 10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。 11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
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实验外包:
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
Alpha1-MG ELISA Kit 大鼠α1微球蛋白Multi-class antibodies: 48T
TLR2/CD282 Toll样受体2抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GLUT4 葡萄糖转运蛋白4抗体 0.1ml
P-gp(Human permeability glycoprotein) ELISA Kit 人P糖蛋白/渗透性糖蛋白 96T
Nesfatin-1 新的饱食分子蛋白抗体 0.2ml
APJ Receptor 血管紧缩样蛋白1抗体 0.2ml
TLR2/CD282 Toll样受体2抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
ASK-1(Human apoptosis signal regulating kinase 1) ELISA Kit 人凋亡信号调节激IMulti-class antibodies: 48T
HIF 2 Alpha 缺氧诱导因子2α 抗体Multi-class antibodies: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MFAP1 微原纤维胶原相关蛋白1抗体 0.2ml
TR(Human targeted ribonuclease) ELISA Kit 人靶向核糖核 96T
REG4 再生基因蛋白4抗体 0.2ml
C6orf130 6号染色体开放阅读框129抗体 0.2ml
HIF 2 Alpha 缺氧诱导因子2α 抗体Multi-class antibodies: 0.1ml
Rabbit Guinea pig IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗豚鼠IgM 0.1ml
Ghrelin 28 脑肠肽抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh AICDA 活化诱导胞嘧啶核苷脱氨抗体 0.2ml
Phospho-LATS1 (Ser909) /FITC 荧光标记磷化抑制基因LATS1抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗羊IgM 0.1ml
SRC /FITC 荧光标记整合样金属蛋白与1型-7抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
转基因玉米Bt10核酸检测试剂盒48T 0.2PCR管猴血管内皮生长因子受体3(VEGFR3/Flt4)elisa检测试剂盒
猴甲酰甲硫(fMet)elisa检测试剂盒
猴角蛋白13(CK-13/KRT13)elisa检测试剂盒
猴白介23(IL-23)elisa检测试剂盒
猴泛关联蛋白2 (UBAP2)elisa检测试剂盒
猴血小板衍生生长因子受体样蛋白(PDGFRL)elisa检测试剂盒
猴中性粒弹性蛋白(NE/ELA2)elisa检测试剂盒
猴多巴脱羧(DDC)elisa检测试剂盒
兔骨涎蛋白(BSP)elisa检测试剂盒
猴β干扰(IFN-β)elisa检测试剂盒
猴磷化腺苷活化蛋白(AMPK)elisa检测试剂盒
猴鸟苷交换因子(GEF)elisa检测试剂盒
猴蛋白脂质蛋白抗体(PLP)elisa检测试剂盒
兔外信号调节1(ERK1)elisa检测试剂盒
兔可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)elisa检测试剂盒
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1ml试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;煸群螅?℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。