化工仪器网
详细介绍
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
产品属于：
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
商品介绍：
本试剂盒是一种采用Annexin V-Alexa Fluor 488与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所*的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色， 因此通常将Annexin V与PI配合染色， 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。 |
操作步骤：
1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为 1×106/ml。
4、取 100μl的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。
Annexin V-Alexa Fluor 488 PI双染流式分析图谱
Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI双染流式分析图谱
储存条件：2～8℃，避光保存
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
抗内皮细胞抗体(AECA)elisa试剂盒英文名称：AECA ELISA Kit载脂蛋白样蛋白6抗体包装5g
抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)elisa试剂盒英文名称：ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相关蛋白TGFb信号抗体包装100g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa试剂盒英文名称：TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗体包装25g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa试剂盒英文名称：TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖转移酶α4Gn-T抗体包装5g
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)elisa试剂盒英文名称：TRACP ELISA Kit芳香乙酰脱乙酰基酶抗体包装10ml
抗抗体(AsAb)elisa试剂盒英文名称：AsAb ELISA Kit芳香乙酰脱乙?；秆鞍?抗体包装1g
抗状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)elisa试剂盒英文名称：ATGA/TGAB ELISA Kit氨基乙二酸半脱氢酶磷酸泛酰巯基乙转移酶抗体包装25g
抗状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)elisa试剂盒英文名称：TPO-Ab ELISA Kit赖氨酸酮戊二酸还原酶抗体包装5g
抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)elisa试剂盒英文名称：EMA IgA ELISA Kit锚蛋白重复域6抗体包装25g
抗环胍氨酸肽抗体(Anti-CCP-antibody)elisa试剂盒英文名称：Anti-CCP-antibody ELISA Kit精氨酸酶2抗体包装5g
抗红细胞抗体(RBC)elisa试剂盒英文名称：RBC ELISA Kit固酮还原酶家族1成员C3抗体包装1g
抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)elisa试剂盒英文名称：gp210 ELISA Kit促肾上腺皮质激素受体包装5g
抗核抗体(ANA)elisa试剂盒英文名称：ANA ELISA Kit褐黑素相关蛋白ART抗体包装1g
抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)elisa试剂盒英文名称：ssDNA ELISA Kit肾上腺皮质线粒体铁氧还蛋白抗体包装250mg
抗单核细胞抗体(AMA)elisa试剂盒英文名称：AMA ELISA KitAllgrove综合征相关蛋白抗体包装5g
磷酸化粘附相关激酶抗体促肾上腺皮质激素(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激酶的 IC5
Alexa Fluor 488/PI细胞凋亡检测试剂盒正磷酸铁四水物
其他磷酸高铁四水物；磷酸铁四水物
英文名称：Ferric phosphate tetrahydrate
其他英文名称：Iron(III) phosphate tetrahydrate
产品规格：CP，98%
包装：250克
CAS号：31096-47-6
FePO4•4H2O=222.88
级别：CP
含量：≥98.0%
氯化物：≤0.1%
砷：≤0.0005%
重金属：≤0.01%
硫酸盐：≤0.05%
氯化物：≤0.002%
其它碱金属：≤1.0%
砷：≤0.0005%
铁：≤0.005%
重金属：≤0.002%
性状：结晶或粉末。无气味，不吸湿。溶于水，水溶液近中性
用途：生化研究
保存：RT
化工仪器网