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中文名称：CCK-8试剂盒

英文名称：Cell counting KIT-8

产品规格：100T|500T|500T*10

发货周期：1～3天

使用说明：

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3、接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴)，OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

二、细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：

1、本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。

6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。

7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性，则测定不含细胞，仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入 MTS ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。

9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，对于大多数情况孵育 1 小时即可，白细胞需要培养较长时间。

11、如果不是使用 96 孔板检测，MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。

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CCK-8试剂盒（猪胰）

英文名称：Trypsin(porcine pancreas)

产品规格：BR，1：250

包装：100克/500克/25克

产品规格：组织培养级，1：300

包装：50克/250克

CAS号：9002-07-7

分子量：23300

级别：BR

效价：1：250

活力：≥250U/mg

干燥失重：≤5.0%

级别：Tissue culture grade

性状：类淡黄色粉末。适温度35～37℃。反应：甘油三酯+H2O＝甘油二酯+脂肪阴离子。对一级酯基团易水解。甘油单酯是差的底物。有两个差不多相同的同工脂肪： A与B。等电点(pI)A为4.9、 B为5.0。吸光系数(E1%280)13.3。激活剂为钙(CA2+)。

用途：生化研究。定量分析血清中甘油三酯。前列腺脂的分析。脂肪分析。用于水解酯键1，3位，分解脂肪成甘油和脂肪

保存：2～8℃

操作规程：

1、在96孔板加入细胞00μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入00微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入00微升5000～0000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～0μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及00%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×00

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 0%时的药物浓度(IC90)