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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的豬心臟微血管內皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的豬心臟微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 豬心臟微血管內皮原代細胞 | 組織來源 | 心臟 |
英文名稱 | Porcine Cardiac Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8557 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
豬心臟微血管內皮細胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官，主要功能是為血液流動提供壓力，把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構成，左心房、左心室、右心房、右心室四個腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以氧和各種營養(yǎng)物質，并帶走代謝的終產物（如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內皮細胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在心臟血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。近年來大量研究表明，心肌微血管內皮細胞的功能和病理改變直接影響心肌細胞功能，也是諸多毒素、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機制和細胞間旁分泌細胞生長因子研究中起著重要作用。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
豬心臟微血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
人羊膜細胞;WISH | FC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體 |
視網(wǎng)膜母細胞瘤相關蛋白p130抗體 | 蛋白精N甲基4抗體 |
天冬蛋白酶家族蛋白抗體 | 肺癌轉移相關蛋白抗體 |
結締組織生長因子抗體 | DCUN1D4蛋白抗體 |
9號染色體開放閱讀框50抗體 | 熱休克蛋白71抗體 |
IL17RB Others Human 人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 人細胞裂解液 (陽性對照) | IL13RA2 Others Mouse 小鼠 IL13RA2 / CD213A2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
卵巢顆粒細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | TNFRSF1B Others Cynomolgus 食蟹猴 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 人細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 Hep G2(肝癌細胞) | VTCN1 Others Human 人 B7-H4 / B7S1 / B7x 人細胞裂解液 (陽性對照) |
大鼠垂體細胞(RPC)(1×106) A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株 Human | NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 A9(皮下結締組織細胞) |
CL-0416Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2 | 豬心臟微血管內皮原代細胞肺癌轉移相關蛋白抗體 |
CD200R1 Others Mouse 小鼠 CD200R1 / OX-2R 人細胞裂解液 (陽性對照) | 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA |
TNFSF15 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF15 / TL1A 蛋白 (Fc 標簽) | NCI-H1703[H1703]細胞，人肺癌細胞 人膀胱癌細胞,5637(HTB-9)細胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細胞HRPEpiC |
MAG Others Human 人 MAG / GMA / Siglec-4 人細胞裂解液 (陽性對照) | 4號染色體開放閱讀框42抗體 |
Kelch樣蛋白32抗體 | EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022 人星形膠質細胞培養(yǎng)基 100mL |
自噬相關蛋白12抗體 | 核苷酸結合蛋白2抗體 |
鳥苷酸激酶GMK抗體 | IL17RB Others Human 人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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