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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的魚脾淋巴采用機(jī)械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的魚脾淋巴經(jīng)過檢測(cè)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 魚脾淋巴原代細(xì)胞 | 組織來源 | |
英文名稱 | Fish Spleen Lymphocyte Cells | 貨號(hào) | YS-01X8552 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
魚脾淋巴細(xì)胞分離自脾臟組織；脾臟是機(jī)體大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處，與9－11肋相對(duì)，長(zhǎng)軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰，前方有胃，后方與左腎、左腎上腺毗鄰，下端與結(jié)腸脾溝相鄰，地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞器官。淋巴細(xì)胞（lymphocyte）白細(xì)胞的一種，由淋巴器官產(chǎn)生，機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分。淋巴器官根據(jù)其發(fā)生和功能的差異，可分為中樞淋巴器官（又名初級(jí)淋巴器官）和周圍淋巴器官（又名次級(jí)淋巴器官）兩類。前者包括胸腺、腔上囊或其相當(dāng)器官（有人認(rèn)為在哺乳動(dòng)物是骨髓）。它們無須抗原刺激即可不斷增殖淋巴細(xì)胞，成熟后將其轉(zhuǎn)送至周圍淋巴器官。后者包括脾、淋巴結(jié)等。成熟淋巴細(xì)胞需依賴抗原刺激而分化增殖，繼而發(fā)揮其免疫功能。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不增殖；不傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
魚脾淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
NCI-H1650人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1650 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS | 核糖體蛋白L5抗體 |
Wnt通路抑制因子2抗體 | 細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白46抗體 |
泌乳素受體抗體 | 凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體 |
上腺素能受體β1抗體 | 驅(qū)動(dòng)蛋白KIF5B抗體 |
血管擴(kuò)張刺激0蛋白抗體 | 鉀離子通道蛋白家族成員2抗體 |
MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽) | 人絨毛膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞 |
RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 Y-99細(xì)胞 CV-1(非洲綠猴腎細(xì)胞) | 人胎盤絨膜癌細(xì)胞;BeWo |
大鼠角膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36 蛋白 (aa 6-158) |
MDA-MB-453 人癌細(xì)胞 | 小鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Pt K1 (NBL-3)袋鼠腎細(xì)胞 Pt K1 (NBL-3) kangaroo kidney cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | 魚脾淋巴原代細(xì)胞凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體 |
人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞;Daoy | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
PDE3A Others Human 人 PDE3A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CM-R049大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3] | 鐵蛋白抗體 |
鈣營(yíng)養(yǎng)蛋白1/鈣結(jié)合蛋白8抗體 | 人胃癌細(xì)胞;MKN-45 |
原纖維蛋白2抗體 | 丙型肝炎非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體 |
類狀瘤病毒33抗體 | MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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