詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠棕色脂肪采用膠原酶消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠棕色脂肪經(jīng)油紅O染色檢測,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠棕色脂肪原代細(xì)胞 | 組織來源 | 脂肪組織 |
英文名稱 | Mouse Brown Adipocyte Cells | 貨號 | YS-01X7631 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介:
小鼠棕色脂肪細(xì)胞分離自棕色脂肪組織;動物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪,白色脂肪堆積在皮下,負(fù)責(zé)儲存多余熱量;棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪,將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量,本身不儲存熱量。棕色脂肪組織呈棕色,其特點是組織中有豐富的毛細(xì)血管,脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴,線粒體大而豐富,核圓形,位于細(xì)胞中央,這種脂肪細(xì)胞也稱為多泡脂肪細(xì)胞。棕色脂肪組織在成年動物極少,新生兒及冬眠動物較多,在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發(fā)揮作用,它們堆積在新生兒肩胛處,幫助維持體溫。隨著年齡增長,棕色脂肪會逐漸消失。終,動物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞,分布于頸部和鎖骨。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色(棕色)脂肪細(xì)胞,常呈白色,在嬰幼兒期大量增殖,到青春期數(shù)量達(dá)到巔,此后數(shù)量一般不再增加。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡,稱為脂質(zhì)泡,富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。此外,還有一種褐色脂肪細(xì)胞,在動物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間、頸背部、腋窩、縱隔及腎臟周圍,含有高度團(tuán)縮的褐色脂肪,作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱,調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
人胰腺癌細(xì)胞;AsPC-1 | 草酰琥珀酸脫羧酶抗體 |
蛋白激酶C抗體 | A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌) |
轉(zhuǎn)錄因子E2F-3抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶23抗體 |
周期素B1抗體 | DEPTOR蛋白抗體 |
9號染色體開放閱讀框68抗體 | 酸化組蛋白H2AX抗體 |
CD48 Others Rat 大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0094HCC827(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP |
綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC-GFP | IGFBP7 Others Human 人 IGFBP7 / IBP-7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | NP Others H1N1 甲型流感 H1N1 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
RKO(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 WEHI 22.1(B淋巴細(xì)胞) |
CL-0428RM1(大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠棕色脂肪原代細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶23抗體 |
LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 牛陀螺狀細(xì)胞;BT |
急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;TALL-104 | BeWo細(xì)胞,人胎盤絨膜癌細(xì)胞 新生牛眼晶體上皮細(xì)胞,NBLE細(xì)胞 人無色素睫狀上皮細(xì)胞HNPCEpiC |
XCL2 Others Human 人 XCL2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 酸化胞漿型0脂酶A2抗體 |
Kelch樣蛋白21抗體 | PLA2G1B Others Human 人 PLA2G1B / PLA2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 | 上腺發(fā)育不全相關(guān)蛋白抗體 |
α葡萄糖苷酶2抗體 | CD48 Others Rat 大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |