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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
產(chǎn)品名稱 | 原代細(xì)胞 | 組織來源 | 詳見說明 |
英文名稱 | 詳見說明 | 貨號(hào) | X0009 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
NCI-H1975細(xì)胞，人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 鼠肝星形細(xì)胞,HSC-T6細(xì)胞 CM-R047大鼠腸微血管細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 核纖層蛋白A相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白1抗體 |
y-盒結(jié)合蛋白1抗體 | 細(xì)胞粘附分子4抗體 |
免疫球蛋白超家族成員3抗體 | 凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體 |
生發(fā)中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體 | 趨化素樣因子超家族成員2抗體 |
血管生成素核糖核酸酶4抗體(肌性側(cè)索硬化癥蛋白) | 間變型淋巴瘤激酶抗體 |
RBE(人膽管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | CL-0268COLO 201(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A 大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | MLA144 MLA144長臂猿淋巴瘤細(xì)胞 |
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHUVEC NA | 貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞;PG-4(S+L-) |
非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1 | 人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC NA |
Jecket細(xì)胞，淋巴瘤細(xì)胞 人肺腺癌細(xì)胞,SPC-A1細(xì)胞 EC109，人食管癌細(xì)胞 | 原代細(xì)胞凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體 |
人外周血白細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | MMP8 Others Human 人 MMP-8 / CLG1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CM-R060大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
A-427(人肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 同源盒蛋白B8抗體 |
甘-N-甲基轉(zhuǎn)移酶 | 人血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
載脂蛋白A4抗體 | 補(bǔ)體C2a鏈多肽抗體 |
李斯特菌溶胞素抗體 | RBE(人膽管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
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