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小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

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更新時(shí)間:2025-05-20 09:35:29瀏覽次數(shù):35

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?
貨號(hào) YS-01X7491 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)    
小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品:小鼠原代尿道上皮細(xì)胞 TG-905(人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) SRA01/04(HLE) 人晶體上皮永生系 1ml/T75 F9 小鼠畸胎瘤細(xì)胞 BRL-3A 大鼠肝細(xì)胞 人原代卵巢癌組織源細(xì)胞

詳細(xì)介紹

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮采用先機(jī)械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品名稱

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

組織來源

結(jié)腸組織

英文名稱

Mouse Colonic   Mucosal Epithelial Cells

貨號(hào)

YS-01X7491

產(chǎn)品規(guī)格

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

用途

僅供科研實(shí)驗(yàn)

 

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介:

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞分離自結(jié)腸組織;結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,大部分固定于腹后壁,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結(jié)締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜)。腸黏膜上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障,持續(xù)暴露于大量抗原中,也是機(jī)體面對(duì)病原微生物的第一道防線。因此,腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)等重要生理功能之外,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞,在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強(qiáng)度。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)方法,為研究腸黏膜上皮細(xì)胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細(xì)胞模型。

培養(yǎng)信息:

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

包被條件 鼠尾膠原2-5μg/cm2

培養(yǎng)基 FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin

換液頻率 2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

公司產(chǎn)品:小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞

腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝:5 ×105次方(1ml)

白介素9抗體

脫氫酶抗體

單克隆抗體

鋅指蛋白FYCO1抗體

多纖毛素蛋白抗體

22號(hào)染色體開放閱讀框29抗體

死亡相關(guān)蛋白5抗體

CD93抗體

同源盒蛋白PRH抗體

SEMA4A Others Human SEMA4A / Semaphorin-4A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

ARSA Others Mouse 小鼠 ARSA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

Burkkit淋巴瘤細(xì)胞;Daudi

CTNNB1 Others Mouse 小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

PDGFC Others Human PDGF-C 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

IFNA2 Others Mouse 小鼠 IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

HPAEC-c 人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HPAEC) 500,000cells 顱蓋造骨細(xì)胞Many types of   cells包裝:5 × 105次方(1ml)

B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞   B16-F10 mouse melanoma cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS

CM-M015小鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞多纖毛素蛋白抗體

CNE-2Z細(xì)胞,人鼻咽癌母系細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞,SP2/0細(xì)胞 恒河猴腎細(xì)胞;RM-1

人腦干星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-bs

人腦成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

TNFSF12 Others Cynomolgus 食蟹猴 / TNFSF12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

CEACAM1 Others Human CEACAM1 / CD66a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

11號(hào)染色體開放閱讀框74抗體

酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體

PC-2細(xì)胞,人胰腺癌細(xì)胞 人皮膚癌細(xì)胞系,HS-4細(xì)胞 小鼠黑色素瘤瘤株;B16

BRD2蛋白抗體

核纖層蛋白A識(shí)別因子抗體

酸化γ1氨基受體GABAA   Rβ1抗體

SEMA4A Others Human SEMA4A / Semaphorin-4A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

 


操作步驟:

小鼠結(jié)腸黏膜上皮原代細(xì)胞
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。

3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。

7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。

10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。



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