詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脊髓元采用膠原酶&酶聯(lián)合消化法、元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脊髓元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠脊髓神經(jīng)元原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 脊髓組織 |
英文名稱 | Mouse Spinal Cord Neuron Cells | 貨號(hào) | YS-01X7540 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠脊髓元細(xì)胞分離自脊髓組織;脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù);是源自腦的中樞系統(tǒng)延伸部分。中樞系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來(lái)處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的信息。人和脊椎動(dòng)物中樞系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對(duì)的,分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由細(xì)胞構(gòu)成;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓纖維組成;脊髓是許多簡(jiǎn)單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對(duì)的(稱為脊)分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍與腦之間的通路,也是許多簡(jiǎn)單反射活動(dòng)的低級(jí)中樞。按脊的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),31對(duì)脊就是由不同的脊椎發(fā)出的。系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是元,即細(xì)胞,其大小和外觀在中樞系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內(nèi)含絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核。一些大元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是元的突起,能在元之間傳遞電沖動(dòng),突起的大小和形態(tài)各不相同,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細(xì)胞,元含量少,分離純化難度大,且脊髓元細(xì)胞是高度分化的終末細(xì)胞,不能分裂增殖,培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓元呈圓形,體積小,透亮,無(wú)突起。培養(yǎng)2-3d,可見胞體增大,突起增多延長(zhǎng);培養(yǎng)6-7d,細(xì)胞體大飽滿,突起明顯增加延長(zhǎng)并交織成網(wǎng),光暈明顯,立體感強(qiáng)。培養(yǎng)20d后,死亡細(xì)胞明顯增加,細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)空泡,突起粗細(xì)不均,甚至脫壁,發(fā)生細(xì)胞崩解。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 元細(xì)胞樣
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
C6/36細(xì)胞,蚊子細(xì)胞 A-704(人腎癌細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A | 過(guò)氧化物酶體肉堿?;D(zhuǎn)移酶抗體 |
S100A13抗體 | 細(xì)胞角蛋白19抗體 |
硫酸角質(zhì)素抗體 | 蛋白酸激酶PKC/CPI-17抗體 |
束蛋白抗體 | 葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白抗體 |
鋅指蛋白BED5抗體 | 畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子抗體(C端) |
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD) | RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 |
3T3/e細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞 白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞,JEG-3/VP16-IL-2細(xì)胞 人腎系膜細(xì)胞RNAHRMC miRNA5 μg | 恒河猴肺細(xì)胞;RM-L1 |
間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪細(xì)胞分化培養(yǎng)基MADM | 小鼠髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞;PIEC |
大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | CL-0234TM3(小鼠間質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
NCI-H2170[H2170]細(xì)胞,人肺鱗狀細(xì)胞癌 人胚腎二倍體細(xì)胞,CCC-HEK-1細(xì)胞 人腦干星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-bs | 小鼠脊髓神經(jīng)元原代細(xì)胞蛋白酸激酶PKC/CPI-17抗體 |
骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)基SkMCM | AAV-293人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line AAV-293 DMEM+10%FBS |
Gibco 12558-011 TM-C100 Complete Medium,(system) 1 set | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0902 |
表皮黑色素細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | 髓系細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子1抗體 |
復(fù)制因子A蛋白2 | 人食道平滑肌細(xì)胞RNAHESMC miRNA5 μg |
有絲分裂蛋白BUB3抗體 | 半乳糖腦苷脂酶抗體 |
跨膜蛋白Orai2抗體 | NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD) |