詳細(xì)介紹
兔椎間盤(pán)髓核原代細(xì)胞
兔椎間盤(pán)髓核細(xì)胞分離椎間盤(pán)組織;椎間盤(pán)是位于脊柱兩椎體之間,分為中央部的髓核,富于彈性的膠狀物質(zhì);周?chē)康睦w維環(huán),由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板,是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來(lái)。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織,能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。髓核,是乳白色半透明膠狀體,富于彈性,為椎間盤(pán)結(jié)構(gòu)的一部分,位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。嬰幼兒時(shí)期的髓核含水量為80%-90%,即使到了老年,其含水量也在70%上下。髓核在出生時(shí)體積大而松散,位于椎間盤(pán)的中央,至成年時(shí)位置移至椎間盤(pán)的中后部;在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復(fù)合體、膠原纖維和纖維軟骨,隨著年齡的增長(zhǎng),髓核中的蛋白多糖解聚增多,水分逐漸減少,膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。
英文名稱(chēng) | Rabbit Nucleus Pulposus Cells | 組織來(lái)源 | 椎間盤(pán)組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7128 |
細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng):兔椎間盤(pán)髓核細(xì)胞
組織來(lái)源:椎間盤(pán)組織
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右;3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔椎間盤(pán)髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔椎間盤(pán)髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
豚鼠皮膚細(xì)胞;GP-S1 | Caspase激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑抗體 |
酸肌醇相互作用蛋白抗體 | Q10B抗體 |
肢體畸形相關(guān)蛋白FMN1抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體 |
3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框34抗體 | 淋巴細(xì)胞抗原75抗體 |
20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框106抗體 | 激素上調(diào)腫瘤相關(guān)激酶抗體 |
IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系);293T/17 人呼吸道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;UACC812 | CD40 Others Rat 大鼠 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
NOG Others Human 人 Noggin / NOG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | IGFBP5 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP5 / IGFBP-5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人小氣管上皮細(xì)胞(HSAEpiC)(5×105 ) MN-s, 小鼠紋狀體元 Mouse | ALPI Others Human 人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
CM-R037大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔椎間盤(pán)髓核原代細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體 |
FCGR2A Others Human 人 CD32a / FCGR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人癌細(xì)胞;MDA-MB-157 | TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NCI-H1755 [H1755](人肺癌細(xì)胞) |
Hs 578Bst細(xì)胞,人成纖維細(xì)胞 表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞,293FT細(xì)胞 胰腺星狀細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | NK細(xì)胞抑制性受體2DL1抗體 |
可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白抗體 | EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
Bcl2相互作用蛋白1抗體(轉(zhuǎn)化相關(guān)基因8蛋白) | 核分布基因E同源蛋白1抗體 |
γ-谷氨?;h(huán)轉(zhuǎn)移酶抗體 | IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |