詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔主動(dòng)脈外膜成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔主動(dòng)脈外膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔主動(dòng)脈外膜成纖維原代細(xì)胞 | 組織來源 | 主動(dòng)脈 |
英文名稱 | Rabbit Aortic Adventitial Fibroblast Cells | 貨號(hào) | YS-01X8052 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介:
兔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞分離自主動(dòng)脈血管外膜組織;血管外膜是由疏松結(jié)締組織組成,其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結(jié)締組織細(xì)胞以成纖維細(xì)胞為主,當(dāng)血管受損傷時(shí),成纖維細(xì)胞具有修復(fù)外膜的能力。有的動(dòng)脈中膜和外膜的交界處,有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細(xì)胞是血管外膜的主要組成細(xì)胞之一,其主要生理功能合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳3-5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
SK-HEP-1人肝癌細(xì)胞 SK-HEP-1 human hepatocarcinoma cells MEM(GIBCO)+10%FBS | 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2受體抗體 |
Ras信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體 | 細(xì)胞分裂周期蛋白23抗體 |
酸激酶1抗體 | 蛋白甘露糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體 |
叢蛋白A2抗體 | 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白190抗體(N端) |
鋅指蛋白288抗體 | 肌相關(guān)蛋白1抗體 |
R-Spondin Protein | MG-63 人成骨肉瘤細(xì)胞 |
SK-MES-1人肺鱗癌細(xì)胞 SK-MES-1 human lung squamous carcinoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | EPO Protein Rat 重組大鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞HUMSC | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1002 |
95-D 人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 | 小鼠食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A 膠質(zhì)瘤細(xì)胞,SHG44細(xì)胞 RD(惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞) | 兔主動(dòng)脈外膜成纖維原代細(xì)胞蛋白甘露糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體 |
AtT20 小鼠垂體瘤細(xì)胞 | BC-019(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤細(xì)胞;P388D1(IL-1) |
PGA4 Others Human 人 PGA4 / Pepsinogen A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CM-M036小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
盤羊皮膚細(xì)胞;ASHS2 | 死亡相關(guān)蛋白5抗體 |
非受體型蛋白酪酸酶7抗體 | 人直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
異質(zhì)性核糖核蛋白C1/C2抗體 | 白細(xì)胞介素1受體相關(guān)蛋白抗體 |
抗利尿激素/血管升壓素/加壓素/血管加壓素抗體 | R-Spondin Protein |