詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
細(xì)胞屬性:
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔支氣管上皮采用蛋白酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合機(jī)械刮刷并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔支氣管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔支氣管上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 支氣管 |
英文名稱 | Rabbit Bronchial Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7991 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介:
兔支氣管上皮細(xì)胞分離自支氣管組織;支氣管(Bronchi),是指由氣管分出的各級分枝,由氣管分出的一級支氣管,即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,前者較細(xì)長,走向傾斜;后者較粗短,走向較前者略直,所以經(jīng)氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是,氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架,而支氣管不是。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線,不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞,還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子,從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。支氣管上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性,因此,在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔支氣管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品:
豚鼠皮膚細(xì)胞;GP-S3 | 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2抗體 |
蛋白質(zhì)酸酶2A-B55抗體 | 鈣依賴分泌激活蛋白1抗體 |
甲精結(jié)合蛋白3抗體 | 髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體 |
衰變加速因子CD55抗體 | 多能發(fā)育相關(guān)基因4抗體 |
20號染色體開放閱讀框151抗體 | 單甲基組蛋白H3K9抗體 |
EPD1 Others Mouse 小鼠 CD39 / EPD1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | F3 Others Mouse 小鼠 F3 / Tissue factor / CD142 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A | ERBB2 Others Human 人 HER2 / ErbB2 / CD340 (676-1255) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H091人大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞RNAHUAEC miRNA5 μg | ESM1 Others Human 人 ESM1 / Endocan 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HDLEC-c 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)來自少年者 500,000cells 骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | HUF Pellet 人子宮成纖維細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HLECL |
CM-R047大鼠腸微血管細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔支氣管上皮原代細(xì)胞髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體 |
HCASMC-c 人冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HCASMC) 500,000cells 小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | 兔脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells |
RN-s, 大鼠紋狀體元 Rattus | 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S4 胃腺癌細(xì)胞,SGC7901細(xì)胞 CW-2(結(jié)腸腺癌細(xì)胞) |
IFNGR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | P450 19抗體 |
上游結(jié)合蛋白1抗體 | ECE2 Others Human 人 ECE-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
腦特異性血管生成抑制蛋白2抗體 | 肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體激酶6抗體 | EPD1 Others Mouse 小鼠 CD39 / EPD1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。