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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的兔羊膜胚胎采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的兔羊膜胚胎經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔羊膜胚胎原代細胞 | 組織來源 | 羊膜組織 |
英文名稱 | Rabbit Amniotic Embryonic Cells | 貨號 | YS-01X7163 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔胚胎羊膜細胞分離自羊膜組織；羊膜為單層上皮細胞互相連接構成的薄膜。單層上皮細胞具有分泌羊水的作用。隨著胚胎的生長發(fā)育，羊膜與絨毛密切緊貼，形成胎膜。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴大而呈半透明的薄膜，無血管，富有韌性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤的兒體面，并不深入胎盤組織中，隨著妊娠的進展羊膜腔逐漸擴大，占據(jù)整個子宮腔，羊膜是胎膜內(nèi)一層，是一層半透明的薄膜，與覆蓋在胎盤、臍帶的羊膜層相連接。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與人眼結膜組織結構相似，含有眼表上皮細胞，包括結膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質，其光滑，無血管、及淋巴，具有一定的彈性，厚0.02~0.5mm，在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜基質層含有大量不同的膠元，主要為i、iii、iv、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份，正是這些成份使羊膜可以充當“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質細胞組成，均具有多分化潛能，可轉化為元，且還有合成、釋放生物活性物質和營養(yǎng)因子的功能。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
蚊源細胞 | 白介素1β/IL-1β抗體 |
氧化酶裝配因子PET112抗體 | 二氫嘧啶酶相關蛋白3抗體 |
叉頭蛋白E3抗體 | 粘蛋白4抗體 |
轉錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 抗體 | 早期發(fā)育調(diào)控蛋白1抗體 |
20號染色體開放閱讀框4抗體 | 海馬豐富基因轉錄蛋白1抗體 |
FUT8 Others Hamster 倉鼠 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | EPOR Others Human 人 EPOR / Erythropoietin Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) |
體細胞;HEL | 大鼠條紋元(RNs)(1×106) |
6T-CEM (人T細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H075人腎足突細胞培養(yǎng)基100mL 人結膜成纖維細胞RNAHConF miRNA5 μg | EPHA3 Others Mouse 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
Sf-9(昆蟲細胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照) | MS1小鼠胰島內(nèi)皮細胞 MS1 mouse islet endothelial cells DMEM培養(yǎng)基+5%FBS |
CM-R063大鼠腎小球內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基100mL | 兔羊膜胚胎原代細胞粘蛋白4抗體 |
293A細胞，HEK293人胚腎上皮細胞 小鼠胚胎成纖維細胞,T6-Swiss albino細胞 CL-0234TM3(小鼠間質細胞)5×106cells/瓶×2 | 人顱骨造骨細胞總RNAHCO NA |
CM-R030大鼠腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基100mL | LMAN2L Others Human 人 LMAN2L 人細胞裂解液 (陽性對照) |
S100A1 Others Human 人 S100A1 人細胞裂解液 (陽性對照) | 平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體 |
富含亮重復蛋白62抗體 | CL-0142LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)5×106cells/瓶×2 |
Bcl2蛋白修飾因子抗體 | 富含亮重復結構域蛋白7抗體 |
半乳糖凝集素9抗體 | FUT8 Others Hamster 倉鼠 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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